Скобликов Н.Э. к.м.н., Забашта Н.Н. д.с.-х..н., Москаленко Е. А. к.т.н.

ГНУ СКНИИЖ Россельхозакадемии, Российская Федерация, г. Краснодар

Зимин А.А., к. б. н.

ФБУН ИБФМ им.Г.К.Скрябина РАН, Российская Федерация, г. Пущино

Skoblikov N.E., Cand. Sci. Med., Zabashta N.N., Dr. Sci. Agr., Moskalenko E.A., Cand. Sci. Techn.

State Scientific Institution North-Caucasus Research Institute of Animal Husbandry of Russian Academy of Agricultural Sciences, Krasnodar, Russian Federation

Zimin A.A., CAnd. Sci. Biol.

Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms, Pushchino, Moscow Region, Russian Federation

Аннотация. изучена динамика титра колифагов поросят раннего возраста, получающих экспериментальный препарат на основе нетрансдуцирующих фагов E. coli. Среднее значение титра коли-фагов в течение всего периода наблюдения составило: в группе I – 2,96 lg БОЕ/г; в группе II – 1,48 lg БОЕ/г.

Ключевые слова: поросята; кишечный микробиоценоз; E.coli; бактериофаги; фаговые препараты; возрастная динамика.

Summary: the dynamics of coli-phage titer has been studied in early aged piglets, fed an experimental preparation based on the not transduce phages of E. coli. The average value of coli-phage titer during the whole observation period was as follows: group I – 2.96 lg PFU/g; group II – 1.48 lg PFU / g.

Key words: piglets; intestinal microbiocenosis; bacteriophage; phage preparations; age dynamics

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научных проектов № 11-04-96575-р_юг_ц; 12-04-90864-мол_рф_нр; 13-04-00991-a.

Изучение динамики кишечных микробиоценозов животных является актуальным направлением микробиологии. На фоне относительно хорошей изученности динамики бактериальных сегментов микрофлоры, фаговые сегменты изучены недостаточно. Работы в этой области немногочисленны [1], работы по фаговой динамке у свиней отсутствуют. Данная работа посвящена описанию количественной и качественной динамики фагов E.coli с высокой частотой детализации (3-7 дней) в кишечнике поросят раннего возраста, получающих экспериментальный препарат на основе нетрансдуцирующих фагов E. coli.

Методика. Для опыта сформированы две группы (по 3 животных) поросят в возрасте 17 дней. Животные второй группы получали на 27-й, 31-й, 35-й день жизни фаговый препарат, представлявший собой микстуру из пяти бактериофагов T4-типа семейства Myoviridae с концентрацией 1,0×10⁸ БОЕ/мл. В проведённых ранее опытах было установлено, что оптимальной схемой применения фаговых препаратов являлось их трёхкратное (с интервалом в три дня) применение в дозировке 1,0×10⁹ БОЕ на голову животным 28-дневного возраста. Учитывая это, мы давали на один приём животному давали 10 мл фаговой микстуры; таким образом, разовая доза фагов составляла 1,0×10⁹ БОЕ на голову.

Производили периодический (с интервалом от 3 до 7 дней) отбор фекалий у 6 поросят 12 раз (всего 72 образца). Для качественной оценки спектра коли-фагов кишечного микробиоценоза свиней из чашек с посевом штаммов E. coli B и E. coli C600 и образовавшимися на них бляшками производили отбор чётких изолированных бляшек, отличавшихся наибольшим морфологическим разнообразием. Бляшки вырезали стерильной петлёй, после чего вносили в пробирки с 4 мл 4-х-часовой культурой соответствующего штамма, культивированного на жидкой среде LB. Затем культивировали при 37°С на качалке в течение 6,5 часов, после чего рост бактерий останавливали добавлением 0,1 мл хлороформа. Полученную взвесь фагов и лизированных бактерий освобождали от клеточного детрита центрифугированием при 14500 об/мин в течение 5 мин.

Результаты исследований и их обсуждение. График динамики титра коли-фагов у поросят первых 3-9 недель жизни имеет следующие общие элементы вне зависимости от приёма фаговых препаратов: исходный (в 17 – 21 день) титр в пределах 3,73 – 5,11 lg БОЕ/г; снижение (до 3,53 lg БОЕ/г в группе I; до 0,33 lg БОЕ/г в группе II); подъём (до 4,76 lg БОЕ/г в группе I; до 3,12 lg БОЕ/г в группе II); окончательное (в 59 – 66 дней) снижение до 0,00 – 0,63 lg БОЕ/г. При этом характерно, что снижение и подъём оказались смещёнными: в группе I снижение и подъём отмечались на 24 и 31 день соответственно; в группе II – на 42 и 46 день соответственно (рис. 1).

Среднее значение титра коли-фагов в течение всего периода наблюдения составило: в группе I – 2,96 lg БОЕ/г; в группе II – 1,48 lg БОЕ/г. Возможно, приём фагового препарата оказывает понижающее влияние на титр колифагов кишечника поросят.

Несмотря на приём фагового препарата, у двух из трёх животных II группы (получавших фаговый препарат) в день отъёма (35-й) не обнаруживались бактериофаги E.coli, в то время, как казалось ожидаемым значительное увеличение фагового титра за счёт «экзогенных» фагов.

Список литературы

1. Golomidova, A, Kulikov, E, Isaeva, A, Manykin, A, Letarov, A. The Diversity of Coliphages and Coliforms in Horse Feces Reveals a Complex Pattern of Ecological Interactions. Appl Environ Microbiol. 2007 October; 73(19): 5975–5981.