Забашта Николай Николаевич, Скобликов Николай Эдуардович, Москаленко Елена Александровна.

ГНУ СКНИИЖ Россельхозакадемии, Российская Федерация, Краснодар

Zabashta Nikolay Nikolaevich, Skoblikov Nikolay Eduardovich, Moskalenko Elena Aleksandrovna,

North-Caucasus Research Institute of Animal Husbandry under Russian Academy of Agricultural Sciences, Krasnodar, Russia

Зимин Андрей Антонович

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К.Скрябина РАН (ИБФМ РАН), г. Пущино, Московская обл., Россия

Zimin Andrey Antonovich

Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms RAS, Pushchino, Moscow reg., Russia

Аннотация: в результате работы установлена характерная динамика коли-титра кишечника поросят первых двух месяцев жизни, в т.ч. – при применении экспериментальных пробиотического и фагового препаратов; выявлены минимальные значения коли-титра всех четырёх групп животных в 53 дня.

Summary: the study showed the characteristic dynamics of intestinal coli-titer in pigs of first two months of life, including – under the application of experimental probiotic and phage preparations; minimum values of coli-titer are revealed in all four groups of animals at the age of 53 days.

Ключевые слова: свиньи; кишечный микробиоценоз; E. coli; возрастная динамика.

Key words: pigs; intestinal microbiocenosis; E.coli; age dynamics

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научных проектов № 11-04-96575-р_юг_ц и
12-04-90864-мол_рф_нр.

Исследованию патогенной E.coli в свиноводстве посвящено множество работ, отчасти потому, что кишечная палочка является экономически одной из наиболее важных патогенных бактерий в свиноводстве [1]. Однако, публикаций о составе комменсальной (непатогенной) кишечной палочки микробиоты свиней значительно меньше [2]. Тем более, немногочисленные публикации, посвящённые исследованию возрастной динамики энтеробактерий (в т.ч. – и E.coli) кишечника свиней были опубликованы относительно недавно [3]. И до сих пор отсутствуют работы, посвящённые детальному исследованию возрастной динамики E.coli при применении пробиотиков, при том, что данные препараты находят самое широкое применение в животноводстве [4].

Целью работы было исследование динамики количества изолятов E.coli в кишечном микробиоценозе поросят первых двух месяцев жизни как при содержании на основном рационе, так и при применении экспериментальных пробиотического и фагового препаратов.

Методика. Были сформированы четыре группы животных, каждая из которых представляла собой гнездо с поросятами (от 8 до 10 поросят), содержавшиеся в одинаковых условиях на одинаковом рационе. Для наблюдения в каждой группе были выбраны по три поросёнка, каждый из которых был промаркирован согласно его принадлежности к группе: от I-1 до IV-3.

Разделение животных на группы имело целью изучение качественных и количественных изменений содержания бактерий E. coli в кишечном микробиоценозе свиней, как при содержании на основном рационе, так и при применении экспериментальных пробиотического и фагового препаратов.

Сформированные группы животных отличались следующими особенностями. Животные группы I содержались только на основном рационе, не получая в течение периода наблюдения экспериментальных препаратов; животные группы II и группы III получали пробиотический препарат на 17-й, 21-й,
24-й, 27-й, 31-й, 35-й, 39-й, 42-й день жизни; животные группы III и группы IV получали фаговый препарат на 27-й, 31-й, 35-й день жизни. Отъём поросят от свиноматок во всех группах проводился на 35-й день жизни.

Каждый из 144 образцов биоматериала, отбираемого от двенадцати животных за двенадцать возрастных периодов, имел индивидуальный номер согласно его принадлежности к конкретному животному и сроку отбора: от I-1-17 до IV-3-66. Из отобранных образцов биоматериала выделяли изоляты E.coli, учитывая морфологические особенности колоний при росте на среде первичного посева и количество (титр) данных бактерий.

Результаты и обсуждение. Из образцов после учёта первичного посева на среде Эндо было выделено 132 изолятов (от 1 до 3 изолятов от одного образца), E.coli.

Что касается количественных параметров содержания штаммов E. coli в кишечном микробиоценозе животных, то было отмечено, что часто в образце биоматериала, содержащем несколько штаммов, один штамм занимал доминирующее положение, определяясь в титре, на 1 - 3 порядка превосходящем другие штаммы.

Что касается суммарного коли-титра в каждом образце, то его динамика имела различия между группами. В группе I коли-титр колебался в диапазоне около 3 – 4 lg КОЕ/г до 42-дневного возраста, после чего поднимался до 5,75 lg КОЕ/г в 46 дней, резко снижался до 1,44 lg КОЕ/г в 53 дня, и снова возвращался в диапазон 3 – 4 lg КОЕ/г в 59 – 66 дней.

В группе II коли-титр сразу после начала приёма пробиотика резко снижался до 1,18 lg КОЕ/г в 21 день, после чего резко повышался до 5,99 lg КОЕ/г к 27 дню, плавно снижался до 1,96 lg КОЕ/г к 53 дню, а затем также повышался в диапазон 3,34 – 4,33 lg КОЕ/г, достоверно не отличаясь в этот период (с 53 дня) от показателя группы I.

В группе III динамика коли-титра весьма напоминала динамику группы I. Лишь в 46 дней коли-титр в III группе составил 2,07 lg КОЕ/г (таким образом, разница с коли-титром в группе I в этот день составила почти 3,7 lg КОЕ/г); во все остальные дни разница между показателями коли-титра в I и в III группах не привышала 1,0 lg КОЕ/г.

В группе IV динамика коли-титра также почти не имела отличий до 42 дня, когда отмечалось наибольшее значение этого параметра (5,15 lg КОЕ/г), после чего наблюдалось снижение до 1,67 lg КОЕ/г (достоверно не отличаясь от группы I), продолжая снижаться до 1,21 – 1,19 lg КОЕ/г в 59 – 66 дней.

Таким образом, можно отметить следующие возрастные колебания коли-титра в группах, отличающиеся от динамики других групп:

• Низкие значения коли-титра в группе II в 21 – 24 дня;
• Высокое значение коли-титра в группе II в 27 дней;
• Снижение коли-титра во всех группах, кроме первой

   (у которой наблюдался пик) в 46 дней;

• Низкие значения коли-титра в группе IV в 59 – 66 дня.

Кроме того, заслуживает внимания факт минимальных значений коли-титра всех четырёх групп в 53 дня.

По результатам определения идентификации штаммов было установлено, что ни один изолят E. coli не обнаруживался повторно у одного у того же животного во все периоды отбора материала, что свидетельствует о постоянном замещении биоваров E. coli кишечного микробиоценоза в онтогенезе.

Список литературы

1. Nagy, B., Fekete, P. Z. (2005). Enterotoxigenic Escherichia coli in veterinary medicine. Int J Med Microbiol 295, P. 443–454.

2. Schierack P., Walk N., Reiter K., Weyrauch K.D. and Wieler L.H. Composition of intestinal Enterobacteriaceae populations of healthy domestic pigs.  Microbiology 153 (2007). – P. 3830-3837.

3. Katouli, M., Lund, A., Wallgren, P., Kuhn, I., Soderlind, O. & Mollby, R. (1995). Phenotypic characterization of intestinal Escherichia coli of pigs during suckling, postweaning, and fattening periods. Appl Environ Microbiol 61. – Р. 778–783.

4. Янченко, В.В., Чиков, А.Е., Осепчук, Д.В. Рационы с пробиотиком для молодняка свиней, отстающего в росте // Ветеринария Кубани. – 2010. – № 6. – С. 8-9.